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急性毒性

嚙齒動物急性經口急性毒性實驗證明，分別給予小鼠和大鼠10g/kg以及16g/kg的三氯蔗糖，均未發現致死現象。

慢性毒性和致性

為評價三氯蔗糖的慢性和亞慢性毒性，相關研究者進行了大量的實驗。有學者以0.3% 、1.0%和 3.0%飲食含量的三氯蔗糖飼喂大鼠78周和104周，研究結果表明三氯蔗糖對大鼠成活率以及行為等均無影響，也未見發生率增加。但1.0%或3.0%的三氯蔗糖處理能促進雌鼠腎重量增加，腎盆上皮增生，并出現腎盆上皮礦質化，這可能與攝入高劑量不易吸收物質有關。3.0%的三氯蔗糖飼喂大鼠104周能降低大鼠平均體重以及數量，促使雌鼠腎上腺皮層性，以及產生。

生殖發育毒性

生殖發育毒性數據表明，三氯蔗糖及其水解產物對雌鼠或雄鼠生殖能力均沒有不利影響。